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                CUT&Tag:一种→研究蛋白质-DNA互作∩关系的新技术

                阅读 : 18
                时间 : 2024年03月06日

                技术简述

                        CUT&TagCleavage Under Targets and Tagmentation),即靶向剪切和标签技术,是?种利用抗体偶联转座酶剪切技术进行高效、高分辨□ 率的DNA测序文库构□建方法,也是替换传统的ChIP-Seq用以研究蛋白质-DNA互作关系研◎究的新方法,属于新?代超微量蛋白互作DNA的技术。可用于检测组蛋白修饰位点、RNAPOLII和转录因?等具有DNA结合功能的蛋白种类,对表观遗传学、肿瘤和干细胞等领域的研究具有重要意义。

                image

                技术流程

                image

                技术应用

                • 判断DNA链的某一特定位置是否发生某种组蛋白修饰;

                • 检测RNA polymerase II及其它反式因子》在基因组上结合位点的精确定位;

                • 研究组蛋白共价修饰与基因表达的关系;

                • 转录因子结合位点研究。

                技术优势

                参数

                ChIP-Seq

                CUT&Tag

                甲醛交联

                超声破碎

                获取片★段化DNA方法

                超声打断

                使用Tn5转座酶

                细胞起始量

                106-107

                单细胞-5*105

                测序深度

                20-50M reads

                3-5M reads(低丰度靶点可尝试增加)

                是否需要完整的建库流程

                需要

                不需要

                Tn5可直接在DNA片段←两端加测序接头,一次PCR扩增即可)

                完成时间

                ≤1

                1-2

                CUT&Tag省掉了甲醛交联、超声破碎和加测序接头的额外工作,使实验时间大大缩短,同时因为检测的灵敏度高,所需的样品的起始量低。测序量也大大减少。


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